产品货号：
GS1473
中文名称：
重组TEV蛋白酶
英文名称：
Recombinant Tobacco Etch Virus Protease
产品规格：
500U|1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在较广的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH6.0～8.5和温度4～30℃的广泛范围内皆有活性，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6XHis标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
在1×rTEV Buffer中，30℃反应1h，剪切效率＞90%的3μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
| 组分 | 500U | 1000U |
| 重组TEV蛋白酶(10U/μL) | 50μL | 100μL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃，避免反复冻融，有效期6个月。
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH8.0,0.1mM DTT,50% Glycerol.
1×rTEV Buffer：
50mM Tris，150mM NaCl，pH8.0，0.1mM DTT。
来源：大肠杆菌
比活力：10U/μL
分子大小：约28kDa
纯度：＞95%(by SDS-PAGE)
标签：His标签
- 在1×rTEV Buffer中，加入30μg融合蛋白和1μL rTEV Protease。
- 在30℃恒温反应1小时后，取40μL上述反应液，置于单独的EP管中。
- 向上述EP管中加入10μL 5×SDS Loading Buffer，样品煮沸5min，取10μL进行SDS-PAGE分析(附图1)。
- 需要指出的是，有些蛋白需要在低温环境下展开实验，这时可以通过延长酶切作用时间或者增加TEV酶的用量，来达到完全消化融合蛋白的目的，一般在不增加酶的用量的情况下，酶切过夜效果也是很好的。
图1：底物的用量为3μg，酶的用量依次为0、0.14、0.29、0.43、0.57、0.71、0.86、1、1.14U反应前融合蛋白45kDa，30℃在1×rTEV Buffer中反应1小时后的酶切产物为27kDa的GST标签和18kDa的目的蛋白。
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